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    bt24-terragene實驗說明

    發布時間: 2025-08-05  點擊次數: 319次

     品牌是Terragene Terragene北京z代理 Terragene 天津z代理  Terragene深圳z代理  Terragene 上海z代理 Terragene湖北z代理 Terragene湖南z代理  Terragene江蘇z代理  Terragene河南z代理 Terragene河北z代理 Terragene石家莊z代理  Terragene深圳z代理 Terragene廣東z代理

    所有推薦的檢測 - 捕獲抗體對都能以相同效率識別 BNP 前體(圖中未展示)。然而,重要的是要注意,市售 BNP 檢測試劑對 proBNP 的識別能力存在 18 - 20 倍的差異,因此,所有推薦的組合都已在一組 11 HF(心力衰竭)患者的血漿樣本中進行了測試,以確保檢測對 proBNP 具有同等識別能力。這一點在使用不同檢測平臺時尤為重要,因為需要選擇在給定條件和平臺下能最佳發揮作用的抗體對。

     

    對于 BNP 免疫檢測,我們建議使用重組糖基化 proBNPC + N GBPs,見第 8 節)作為標準品,因為血液中 BNP 的前體主要以糖基化 proBNP 的形式存在。

     

    校準曲線:所有推薦的 BNP 免疫檢測都能識別三種具有相同效率的 BNP 前體多肽:合成 BNP、重組非糖基化 proBNP 和重組糖基化 proBNP。圖 5 展示了 9M1 - 24C5A)和 5T4 - 12B)兩種基于抗體的免疫檢測的代表性校準曲線。我們之前已詳細描述過 9M1 - 24C5 免疫檢測,并在內部測試中證明了其分析靈敏度(使用合成 BNP 作為校準品時)優于 0.05 pg/ml(圖 7D)。其他抗體對的分析靈敏度也列于下文的識別部分。

     

    BNP 表位與市售 BNP 檢測試劑的表位具有良好的相關性:為了確定推薦的 BNP 免疫檢測所識別的表位是否與市售檢測試劑識別的表位相似,我們比較了兩種市售檢測試劑(Alforti STAT BNP 檢測試劑,表位為 36 - 24 5 - 13Siemens 檢測試劑,表位為 26 - 12 12 - 2)以及我們的 9M1 - 2429 檢測試劑(分別針對 26 - 12 12 - 2 表位)的識別情況。具有相同表位特異性的檢測試劑的檢測結果相關性良好。用 BNP 免疫檢測(9M1 - 2429)獲得的檢測結果與 Alforti STAT BNP 檢測試劑(圖 6A)和 Siemens BNP 檢測試劑(圖 6B)的檢測結果相關性良好。使用針對 26 - 12 12 - 2 表位的檢測試劑獲得的結果與針對 37 - 24 14 - 21 表位的 Siemens 檢測試劑(圖 6B)的結果相關性良好。我們的一種檢測試劑(5M1 - 130)與 Siemens 檢測試劑(r = 0.97)也顯示出良好的相關性。

     

    每種檢測試劑都使用內部標準物質進行校準。市售檢測試劑的表位特異性可在 IFCC 網站上查詢。

     

    腦啡肽酶抑制及其對BNP免疫檢測的影響

    通過阻止內源性BNP的降解來增加其水平,被認為是心力衰竭(HF)治療的一種潛在策略。最近,一種名為Entresto®(“諾欣妥",譯者注  )的藥物已獲批準用于HF治療。該藥物的活性成分之一是腦啡肽酶抑制劑,有觀點認為,給HF患者使用這種抑制劑,會使BNP前體肽(proBNP)相關分子的水平升高 

    市售BNP檢測試劑的設計通常基于識別兩種表位的抗體對,至少其中一種表位針對BNP分子的C端結構,另一種表位針對BNP環結構(見圖2中的17 - 118序列)。鑒于腦啡肽酶切割位點位于環結構,合理推測識別環結構表位的免疫檢測抗體,在腦啡肽酶改變proBNP的情況下,可能會受到影響。然而,HF患者中proBNP的復雜多樣性,以及心臟分泌的proBNP活性形式的多樣性,意味著這個問題沒有簡單答案。

    我們研究了腦啡肽酶活性對多種BNP免疫檢測的影響,方法是將proBNP暴露于腦啡肽酶。令人驚訝的是,proBNP對腦啡肽酶具有抗性。3C4 - 3G12對腦啡肽酶的抗性似乎是由于腦啡肽酶切割表位的抗性。而捕獲抗體識別環結構的檢測試劑,如5T4 - 12,確實會因腦啡肽酶切割而受影響,這與預期一致  。我們發現5T4 - 12對腦啡肽酶切割敏感,而5T4 - 32也對腦啡肽酶作用有抗性(數據未展示)。

    我們還發現,未經過處理的proBNP(它是BNP免疫檢測中主要的待測分子形式)實際上不會被腦啡肽酶切割,因此,僅設計用于檢測BNP的試劑,不會受到此類藥物(指腦啡肽酶抑制劑類藥物  )的影響 

     

    NT - proBNP檢測試劑的研發

    NT - proBNPproBNPN端部分,包含76個氨基酸,有7個糖基化位點。已發現NT - proBNP的生物活性僅為BNP1/1000,這在一定程度上意味著,在臨床樣本中,NT - proBNP更穩定。計算得出的NT - proBNP等電點為8.45,分子質量為8.54 kDa。但由于糖基化,其表觀分子質量更高 

     

    糖基化對NT - proBNP檢測的影響

    我們的研究表明,NT - proBNP的糖基化會對某些抗體的識別產生負面影響。NT - proBNP分子的中央區域(如28 - 56位)因去糖基化而容易被抗體識別,而13 - 27位和61 - 76位區域的糖基化則已被充分認識 

    為了減少糖基化對NT - proBNP測量的影響,我們使用了來自8HF患者的樣本,這些樣本在去糖基化前后,分別用兩種檢測試劑進行檢測:一種檢測試劑的抗體對針對無 糖基化位點(15C4 - 13G12),另一種檢測試劑的抗體對針對糖基化位點(11D1 - 13G12)。圖7顯示,去糖基化對后一種檢測試劑的檢測結果有顯著影響。

    在檢測NT - proBNP時,糖基化及其對檢測的影響應在檢測試劑研發過程中予以考慮。建議選擇對糖基化不太敏感的抗體 

     

     

     

    7  糖基化對NT - proBNP檢測有不同程度的影響

    使用兩種不同的免疫檢測方法(AAlforti NT - proBNP檢測試劑,識別無 糖基化表位;B為針對糖基化表位的檢測試劑  ),對8HF患者樣本在去糖基化前后的樣本進行檢測。兩種檢測試劑在檢測天然(糖基化)形式(黑色圓點)和去糖基化形式(紅色圓點)的NT - proBNP時,結果差異顯著。在A檢測試劑中,去糖基化幾乎不影響檢測;而在B檢測試劑中,去糖基化會使檢測信號大幅改變 

     

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